EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD INTRACELULAR Y EXTRACELULAR DE LACASAS EN CEPAS DEL GÉNERO PLEUROTUS

Abstract

Se evaluó la actividad de lacasas intracelular y extracelular de 10 copas del género Pleurotus, sobre cinco diferentes sustratos, determinando los patrones zimográficos de estas enzimas. Las cepas se desarrollaron en un medio no inductor de lacasas. El extracto enzimático intracelular se obtuvo por lisis celular de las hifas de cada cepa y el extracto enzimático extracelular por lixiviación del agar sin micelio. La actividad de lacasas se determinó in vitro utilizando 2,6-dimetoxifenol (DMP), ABTS, siringaldazina, p-anisidina y o-tolidina como sustratos; se consideró a una unidad de actividad enzimática (U) como la cantidad de enzima que provocó un incremento en una unidad de absorbancia por min, y se reportó por gramos de biomasa seca (U/gX). Los zimogramas se revelaron con DMP, p-anisidina y o-tolidina. Los resultados obtenidos muestran que los hongos del género Pleurotus son importantes productores de enzimas lacasas, ya que todas las cepas presentaron actividad sobre todos los sustratos, pero tuvieron grandes diferencias entre cepas, siendo en general, las cepas de P. cornucopiae y P. ostreatus las que presentaron más actividad intracelular y extracelular. Los patrones zimográficos de lacasas mostraron diferente número de isoformas intracelulares con respecto a las extracelulares. Estos resultados fueron iguales en todos los sustratos utilizados, lo que muestra que todas las isoformas, tanto intracelulares como extracelulares, tienen la misma capacidad de oxidar a los tres sustratos. Los patrones zimograficos intracelulares de las seis cepas de P. ostreatus presentaron dos isoenzimas de lacasas en la misma posición sobre el gel. Pero las isoformas de lacasas de las cepas de P. pulmonarius fueron diferentes (menor peso molecular) a las de P. ostreatus, al igual que la banda de actividad presente en P. cornucopiae, lo cual sugiere que el perfil de lacasas, tanto intracelular y extracelular, es particular de cada especie, aún tratándose de cepas del mismo género. Estos resultados muestran diferencias en cantidad y número de isoformas entre las cepas, posiblemente, debido a que se trata de especies diferentes, lo cual sugiere que la zimografía de lacasas podría ser utilizado como marcador taxonómico para la diferenciación de especies de Pleurotus. Por otro lado, estos mismos resultados permitieron detectar las cepas que producen mayor cantidad de enzimas lacasas, las cuales se podrían utilizar (P. cornucopiae y P. ostreatus) para producir estas enzimas por fermentación.